材料和方法

材料

美沙拉秦（也称为美沙拉秦或5-ASA，水溶性1.32 mg/ml，[11]log P 0.98[13]）来自Sigma-Aldrich（英国多塞特），泼尼松龙（log P 1.59[14]）来自塞文生物技术有限公司（英国伍斯特郡）。水、甲醇、不含过氧化氢的四氢呋喃和三氟乙酸从Fisher Scientific（英国拉夫伯勒）购买，为HPLC级。缓冲容量测定用NaOH和HCl的容量标准从Sigma-Aldrich处获得。

胃肠组织

所有程序均由内政部批准（PPL编号70/6421），并根据英国1986年《动物（科学程序）法》进行。猪的胃肠道是在切勒肉类有限公司（英国埃塞克斯）的屠宰场从新鲜杀死的雄性动物（大白种和长白种杂交，n=3,95–110千克，6个月）获得的。成年新西兰大白兔（n=6,2.1-2.3 kg，9-10周）和Wistar大鼠（n=8220-255 g，8周）购自英国哈兰有限公司（英国牛津郡）。所有动物都可以自由饮水，并在处死前自由进食：兔子，实验室饮食5322，添加维生素C（英国诺丁汉郡IPS）；猪，Eltabreed Bingle母猪蛋糕-猪用复合饲料（ABN有限公司，英国彼得伯勒）；大鼠，Teklad全球18%蛋白质啮齿动物饮食（哈兰有限公司）。

胃肠液

所有测量均在从动物胃肠液中获得的上清液上进行。处死动物，将胃肠道分为胃、小肠、盲肠和结肠。如前所述，进一步细分小肠和结肠。[6,12]将胃肠液转移到适当的容器中，然后以13200 rpm的转速离心（德国汉堡Eppendorf AG 5415D离心机）(∼16 110×g rcf）保存20分钟。上清液在–80°C下保存，直至分析。由于大鼠胃肠道的液体容量有限，根据解剖位置收集了8只大鼠的液体，包括胃、小肠（近端、中部和远端）、盲肠和结肠。这些液体的缓冲容量、渗透压和表面张力的特征如下所述。还测定了药物在这些液体中的溶解度。所有测量均以一式三份进行。由于来自大鼠的液体的汇集性质，所述标准偏差代表分析变异性；然而，对于兔子和猪来说，它代表了动物间的变异性。

渗透压

使用数字微渗透计（5R型）（德国柏林Hermann Roebling Messtechnik）测定胃肠液上清液的渗透压，其中渗透压是利用冰点降低理论测量的。每次测量使用100μl的体积。

表面张力

使用Delta-8管理软件（版本3.8）控制的Delta 8张力计（芬兰埃斯波Kibron公司）测量表面张力。使用DynePlates（为张力计设计的96孔板）进行测量，每个孔中有50μl上清液。

pH值和缓冲容量

使用配有FC202电极的pH计（HI99161）测量GI上清液的pH值和缓冲容量，该电极用于测量粘性和半固体材料（Hannah Instruments，Bedfordshire，UK）。在pH值变化为0.5和1.0单位时，通过向胃肠液中的300μl上清液样品中添加小份HCl（用于肠液）或NaOH（用于胃液）来测量缓冲液容量，以达到所需的pH值变化。然后使用以下方程式计算缓冲容量：

式中，Ma是酸的摩尔浓度，Va是酸的体积（单位：毫升），Vb是缓冲液的体积（单位：毫升），ΔpH是pH单位的变化。

溶解度研究

样品处理和溶解度测量

过量的毒品(∼20毫克强的松龙或∼将15mg美沙拉秦）添加到含有200μl胃肠液上清液的微离心管（Eppendorf AG）中。然后将样品置于振荡浴（英国拉夫伯勒加伦坎普）中，温度保持在37°C，转速为170 rpm。24小时后，以5000 rpm的转速离心样品(∼4472×g rcf）在37°C下放置10分钟（离心机5804R，Eppendorf AG）。将上清液依次转移至离心过滤管（康宁Spin-X，0.22μm醋酸纤维素膜，从英国莱斯特郡费希尔科学公司获得），然后以5000 rpm离心(∼4472×g rcf）在37°C下放置20分钟（离心机5804R，Eppendorf AG）。在分析之前，取下等份滤液（50μl）并用1950μl流动相稀释。该方法之前已经过验证[11]，以避免药物在生物液体中降解或与过滤器结合而影响溶解度结果。

分析方法

使用先前报告的方法，通过配备紫外线检测器（安捷伦科技1200系列，加利福尼亚州圣克拉拉）的反相高效液相色谱法测定样品中溶解的泼尼松龙或美沙拉秦的量。[11]空白胃肠液样品（来自“样品处理和溶解度测量”部分的无药物上清液）也以与测试溶解度的样品相同的方式分析，以排除在药物保留时间出现干扰峰的可能性。空白样品以与样品相同的方式稀释，过滤并随后分析。色谱条件为：流动相（5%甲醇，95%水加0.05%三氟乙酸用于美沙拉秦，68.8%水，25%四氢呋喃和6.2%甲醇用于泼尼松龙）；反相柱，水对称性C8 5μm 4.6×250mm（美国马萨诸塞州米尔福德沃特斯）用于泼尼松龙，5μm 250×4mm（德国达姆施塔特默克）用于美沙拉秦。美沙拉秦和泼尼松龙分别在228nm和254 nm处检测，保留时间分别为7.0和9.9分钟。两种药物的剩余分析条件相同（即：20μl注射量，124 bar和40°C柱温下的流速为1 ml/min）。

统计分析

总体数据通过单向方差分析进行分析，然后使用IBM SPSS Statistics 19（美国伊利诺伊州芝加哥SPSS Inc.）进行Tukey事后分析，置信区间为95%。使用一元一般线性模型工具，结合Tukey事后分析，将物种和位置作为固定因素，事后结果的统计显著性为P<0.05。

Delta-8 动物胃肠道体内中药物的溶解度的测定——摘要、介绍

Delta-8 动物胃肠道体内中药物的溶解度的测定——材料和方法

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Delta-8 动物胃肠道体内中药物的溶解度的测定——结论、致谢！